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teses, mestrado, doutoramento, universidade técnica de lisboa
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doutoramentos e mestrados resumos de teses volume 20 ano de 2008 edição reitoria da universidade tÉcnica de lisboa departamento de planeamento e documentação da utl rua da junqueira 86 1349-025 lisboa telef 351-21 361 1745 fax 351-21 361 17 00 17 e-mail sdpublic@reitoria.utl.pt internet http www.reitoria.utl.pt data julho 2010 composição Área de documentação da utl capa design serafim silva artes gráficas maia deposito legal 76368 2[close]
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estudo da função do gene delta4 na regulação da angiogénese rui miguel santos benedito doutoramento em ciência e tecnologia animal orientador antónio josé de freitas duarte provas concluídas em 26 de março de 2008 resumo o sistema vascular é um dos mais importantes nos mamíferos sendo o primeiro a tornar-se funcional durante o desenvolvimento embrionário a sua formação requer uma coordenação complexa de diversos mecanismos genéticos e celulares o estudo destes mecanismos é de grande importância para o desenvolvimento de novas terapias que pretendam inibir ou promover a formação de novos vasos sanguíneos neoangiogénese a via de sinalização notch está envolvida na diferenciação de uma grande variedade de tipos celulares esta tese descreve um trabalho de investigação com o objectivo de caracterizar a função de um novo ligando da via notch delta4 no desenvolvimento vascular em mamíferos para isso recorreu-se à análise de uma linha de ratinhos com inactivação de um ou dos dois alelos do gene delta4 a caracterização fenotípica destes mutantes permitiu descobrir que o gene é essencial para a diferenciação e desenvolvimento dos vasos arteriais e que uma diminuição da sinalização notch induzida por este ligando aumenta a sensibilidade das células endoteliais a estímulos angiogénicos no seu conjunto os resultados mostram que o gene delta4 é fundamental para o desenvolvimento normal dos vasos sanguíneos podendo ter também um papel importante na neoangiogénese do adulto pelo que constitui um alvo terapêutico a explorar study of the delta4 function in the regulation of angiogenesis abstract the vascular system is one of the most important in mammals and the first to become functional during embryonic development its formation requires the complex coordination of several genetic and cellular mechanisms understanding these mechanisms is highly important for the development of new therapies devised to inhibit or promote the formation of new blood vessels neoangiogenesis the notch signalling pathway allows the differentiation of a wide variety of cell types this thesis describes the research work aimed at characterizing the role of a novel notch ligand delta4 in the mammalian vascular development in order to approach this a mouse line with the inactivation of either one or both alleles of the delta4 gene was analyzed the phenotypic characterization of these mutants allowed us to discover that this gene is essential for the differentiation and development of the arteries and that a decrease in the ligand induced notch signalling increases endothelial cell sensibility to the angiogenic stimulus taken together these results show that the delta4 gene is essential for the normal blood vessel development and that it might also have an important role in the adult neoangiogenesis constituting a novel therapeutic target to be explored 9[close]
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estrutura e função de módulos não catalíticos envolvidos na degradação da parede celular vegetal o efeito de enzimas exógenas na valorização nutritiva de dietas à base de lupinus albus para leitões virgínia maria rico pires doutoramento em ciência e tecnologia animal orientador carlos mendes godinho de andrade fontes provas concluídas em 15 de outubro de 2008 resumo as glicósido hidrolases modulares que atacam polissacáridos estruturais possuem módulos não catalíticos de ligação a hidratos de carbono cbms que desempenham uma função crucial na acção destas enzimas por possibilitarem um contacto prolongado da enzima com o substrato neste trabalho descrevem-se as características bioquímicas e estruturais de dois cbms o módulo c-terminal da cel5b do cellvibrio mixtus o cmcbm6-2 e um cbm da família 11 do clostridium thermocellum o ctcbm11 os resultados indicam que o cmcbm6-2 pode ligar-se a glucanos de ligações -1,4 ou -1,3 na fenda a e na fenda b e que ambas as fendas são necessárias para a ligação à celulose insolúvel contudo apenas a fenda b interage com as regiões internas dos glucanos de ligações -1,3-1,4 suportando a hipótese de que a variação da especificidade em membros da família cbm6 reflecte a funcionalidade diferenciada das duas fendas de ligação o ctcbm11 possui uma preferência específica para glucanos de ligações mistas -1,3-1,4 e revelou possuir uma única fenda de ligação que pode acomodar glucanos contendo ligações tanto mistas -1,3 1,4 como ligações exclusivas -1,4 no c thermocellum tal como noutros microrganismos anaeróbios o celulossoma consiste num complexo multi-enzimático de celulases e hemicelulases que é organizado pela interacção do módulo coesina com os módulos doquerina presentes nas subunidades catalíticas neste trabalho apresenta-se a estrutura tridimensional da coesina do tipo ii da sdba do c thermocellum que possui uma elevada homologia com as coesinas do tipo i propõe-se que o local de ligação à doquerina está conservado em ambas as proteínas finalmente estudou-se o efeito da suplementação enzimática de uma dieta à base de lupinus albus para leitões a suplementação enzimática não apresentou efeitos significativos na digestibilidade ileal aparente da proteína bruta e na digestibilidade ileal verdadeira dos aminoácidos mas a digestibilidade ileal da fracção fibra neutro detergente aumentou o que sugere uma actividade residual das hemicelulases presentes nos preparados de alfagalactosidases utilizados na melhoria do valor nutritivo deste tipo de dietas structure and function of non-catalytic modules involved in plant cell hydrolysis exogenous enzymes to improve the nutritive value of a lupinus albus based diet for piglets abstract modular glycoside hydrolases that attack recalcitrant polymers generally contain noncatalytic carbohydrate-binding modules cbms which play a critical role in the action of these enzymes by directing the appended catalytic domains onto the surface of their substrates here we report the biochemical and structural properties of two cbms the cmcbm6-2 located at the c-terminus of cellvibrio mixtus endoglucanase 5b was shown to contain two binding sites that display differences in ligand specificity supporting the view that distinct binding clefts with different specificities can contribute to the variation in ligand recognition displayed by family 6 cbms in addition the family 11 cbm ctcbm11 from clostridium thermocellum bifunctional lichenasecelulase enzyme lic26a-cel5e demonstrated a preference for mixed linked glucans and contains a single ligand-binding site that displays affinity for both -1,4 and -1,3 1,4 mixed linked glucans this enzyme is part of the 10[close]
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cellulosome which represents an efficient multi-enzyme complex of cellulases and hemicellulases for the hydrolysis of cellulose cellulosome assembly results from the interaction of cohesin with dockerin modules present in the catalytic units here we report the crystal structure of the type ii cohesin cohii from c thermocellum cell surface anchoring protein sdba the structure of cohii is very similar to the type i cohesin and the dockerin binding site is likely to be conserved in the two proteins finally in this study the effect of supplementing a lupin based diet for piglets with -galactosidases was evaluated enzyme supplementation had no significant effect on the apparent ileal digestibility of crude protein and true ileal digestibility of amino acids but the ileal digestibility of ndf neutral detergent fibre was increased which suggests a residual hemicellulase activity in the -galactosidases used efeitos da ingestão de pastagem no desempenho produtivo e na qualidade da carne de frangos em crescimento patrícia isabel pinheiro da ponte doutoramento em ciência e tecnologia animal orientador carlos mendes godinho de andrade fontes provas concluídas em 12 de dezembro de 2008 resumo os efeitos da ingestão de pastagem no desempenho produtivo e na qualidade da carne de frangos em crescimento bem como o potencial interesse da suplementação das dietas destes animais com celulases e hemicelulases na produção de frangos ao ar livre continuam por avaliar os resultados obtidos neste trabalho revelam que a ingestão de pastagem incrementa o desempenho produtivo e contribui para a melhoria dos atributos sensoriais da carne de frango no entanto a ingestão de pastagem foi baixa em aves com acesso ad libitum ao alimento composto a restrição da ingestão do alimento à base de cereais originou um aumento no consumo relativo de pastagem de leguminosas promovendo o desempenho produtivo das aves por outro lado a suplementação da dieta com celulases e hemicelulases não afectou o crescimento de frangos com acesso a pastagens à base de leguminosas os resultados sugerem que em aves de estirpes de crescimento lento criados em sistemas de produção ao ar livre -glucanases de origem desconhecida podem afectar a eficiência de enzimas exógenas adicionadas a dietas à base de cevada a baixa ingestão de pastagem resultou num efeito moderado no perfil de ácidos gordos e homólogos da vitamina e na carne de aves provenientes de sistemas de produção ao ar livre no entanto a restrição de alimento composto promoveu uma maior ingestão de pastagem à base de leguminosas o que influenciou significativamente o perfil de ácidos gordos da carne apesar da ingestão de pastagem não influenciar os níveis de ácido linoleico la os teores de n-3 ácidos gordos poli insaturados pufa na carne de frango foram significativamente mais elevados em animais com acesso a pastagem igualmente o consumo de forragem desidratada por frangos produzidos convencionalmente não afectou os teores de vitaminas antioxidantes e de colesterol na carne de frango tendo influenciado o perfil de ácidos gordos da carne a ingestão de forragem não afectou os teores de la e ácido linolénico ala no entanto verificaram-se níveis de n-3 pufa de cadeia longa de carne de frango mais elevados em animais que consumiram forragem desidratada o que sugere uma importante deposição de ala no músculo e a sua conversão nos seus derivados de cadeia longa em aves que consumiram forragens frescas ou desidratadas à base de leguminosas 11[close]
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effect of pasture biomass intake on growth performance and meat quality of free-range broilers abstract the effects of forage intake in both broiler performance and poultry meat quality remain to be established in addition the potential interest of exogenous cellulases and hemicellulases to improve the nutritive efficacy of free-range chicken remains to be evaluated data presented here reveal that pasture consumption promotes bird performance while contributing for the production of broiler meat with preferred sensory attributes however low levels of pasture intake were recorded in birds receiving ad libitum a concentrate feed the restriction of the cereal-based feed intake increased the relative levels of leguminous pasture intake leading to an overall negative influence in bird performance in addition cellulase and hemicellulase supplementation had no impact on the performance of birds foraging in legume-based pastures the results suggest that in older birds of slow-growing genotypes subjected to free-range production systems previously unknown sources of beta-glucanases can affect the effectiveness of exogenous enzymes added to the feed the low levels of pasture intake had a low impact on the fatty acid and vitamin e homologue profiles of free-range poultry meat when cereal-based feed was restricted the higher consumption of the leguminous pasture significantly affected meat fatty acid profile although pasture intake did not influence the contents in linoleic acid la of poultry meat the levels of n-3 polyunsaturated fatty acids pufa in breast meat were significantly higher in animals consuming leguminous biomass dehydrated forage consumption by conventionally reared broilers had no impact on antioxidant vitamins and cholesterol contents of broiler meats but had a significant effect on meat fatty acid composition forage intake did not affect the la and linolenic acid ala contents in poultry meat but the levels of n-3 long-chain pufa in breast meat were higher in animals consuming leguminous biomass the data suggest an important deposition of ala in the muscle and the conversion of ala to its long-chain derivatives in broilers consuming fresh or dehydrated leguminous based forages contribuição para o estudo de mecanismos de apoptose em infecção de vírus da peste suína africana vpsa em macrófagos de suíno maria raquel seiça portugal doutoramento em ciência e tecnologia animal orientador carlos manuel lopes vieira martins provas concluídas em 8 de outubro de 2008 resumo a modulação de apoptose em macrófagos de suíno foi estudada durante infecção in vitro pelos isolados de vírus da peste suína africana vpsa l60 de alta virulência e nhv de baixa virulência ambos desencadearam apoptose mas morte celular expressiva observou-se apenas tardiamente após conclusão do ciclo viral na infecção por l60 identificou-se menor fragmentação internucleossómica fin de dna a tempo precoce e menor activação de caspase-3 durante 18h de infecção em correlação quantificou-se maior expressão de mrna do gene viral homólogo de bc 2 muito precocemente após infecção por l60 e maior produção de proteína viral homóloga de iaps ao longo desta em comparação com nhv contudo a tempo tardio 18h a fin de dna foi semelhante em ambas infecções a inibição de caspases por zvadfmk não preveniu significativamente a fin sugerindo independência daquelas proteases no processo apoptótico desencadeado pelo vpsa 12[close]
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apesar da diferente modulação de apoptose ambos os vírus produziram progenia semelhante após 18h de infecção sugerindo exigências particulares de cada isolado para completar o seu ciclo de replicação in vitro o estudo do significado in vivo das diferenças na modulação de apoptose por l60 e nhv poderá contribuir para a melhor compreensão da patogenia de infecção pelo vpsa contribution for the study of apoptosis mechanisms in infection by african swine fever virus asfv on swine macrophages abstract modulation of apoptosis by african swme fever vlrus vpsa in swme macrophages was studied during in vitro infection by highly virulent l60 and low virulence nhv both isolates triggered apoptosis but meaningful cell death was observed only late in infection after viral cycle conclusion l60 induced lesser dna internucleosomic fragmentation inf at early time and lesser activation of caspase-3 along 18h infection accordingly expression of mrna for viral bcl-2 homologue gene at very early infection and of viral protein homologue to iaps along infection was higher with l60 when compared to nhv at late time however 18h dna inf was similar in both infections caspase inhibition by zvad-fmk didn t significantly prevent inf suggesting that the apoptotic process triggered by asfv may be independent of such proteases in spite of the different modulation of apoptosis both viruses produced similar progeny after 18h infection suggesting diverse demands of each isolate to accomplish replication in vitro study of the in vivo significance of differences in apoptosis modulation by l60 and nhv may open new insights for the understanding of asfv pathogenesis análise da função de delta4 na regulação da angiogénese embrionária e neo-angiogénese tumoral alexandre josé neto trindade doutoramento em ciência e tecnologia animal orientador antónio josé de freitas duarte provas concluídas em 17 de dezembro de 2008 resumo o correcto desenvolvimento dos embriões de metazoários segmentados depende do desenvolvimento de um sistema vascular sanguíneo um processo regulado a vários níveis este passo do desenvolvimento embrionário passa por vários eventos morfogenéticos que resultam na conversão funcional de células progenitoras responsivas a factores pró-angiogénicos em redes complexas de vasos sanguíneos que cobrem todo o organismo e acompanham o crescimento do embrião o desenvolvimento do sistema vascular é um processo dinâmico em que as células endoteliais integram continuamente sinais de expansão e amadurecimento da rede vascular a presença de sinais conflituosos resulta num sistema altamente dinâmico que responde rapidamente às necessidades mas que não se expande desnecessariamente existem várias vias de sinalização que estão envolvidas na regulação da remodelação do sistema vascular embrionário neste trabalho avaliou-se a importância de dll4 um ligando da via de sinalização notch neste papel produziram-se linhas de ratinhos transgénicos com sobre-expressão condicional de dll4 que revelaram um papel importante deste gene na determinação da identidade endotelial arterial e na indução de quiescência e maturação do sistema vascular neste sentido 13[close]
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dll4 reduz o perfil migratório das células endoteliais inibe a formação de novas ramificações vasculares estimula o recrutamento de células de músculo liso aumenta a produção de matriz extracelular aumenta a adesão celular homotípica e reduz a proliferação endotelial este papel é conseguido pelo menos parcialmente por dll4 através da via notch actuar de forma negativa sobre o funcionamento de vias próangiogénicas como a via vegf e wnt a análise da função de dll4 no desenvolvimento da vasculatura tumoral confirmou o papel antiangiogénico deste gene os resultados revelaram que o bloqueio do funcionamento deste gene resulta numa vasculatura hiper-ramificada mas hipo-perfundida que não suporta o crescimento tumoral este facto sustenta a hipótese do controlo do funcionamento de dll4 apresentar potencial terapêutico na luta contra o cancro analysis of dll4 function in the regulation of embryonic angiogenesis and tumoral neo-angiogenesis abstract the correct development of the segmented metazoan embryo depends on the development of a blood vascular system a highly regulated process this step in embryonic development goes through various morphogenetic events which result in the functional conversion of angiogenic responsive progenitor cells into complex networks of blood vessels that span the entire organism and accompany the growth of the embryo vascular system development is a dynamic process in which endothelial cells continuously integrate vascular expansion and maturation signs the presence of conflicting signals results in a highly dynamic system that responds quickly when is needed but doesn`t grow uncontrolled various signalling pathways are involved in the regulation of the embryonic vascular system remodeling in this work the importance of dll4 a notch pathway ligand in this role is evaluated dll4 conditional overexpression transgenic mouse lines were produced which revealed an important function of the gene in the determination of arterial endothelial identity and in the induction of quiescence and maturation of the vascular system dll4 function is shown to reduce endothelial migration sprouting and branching recruitment of smooth muscle cells endothelial proliferation and increase the production of extracellular matrix and homotypic cellular adhesion these cellular functions are affected at least partially by dll4 activated notch signaling negatively regulating pro-angiogenic pathways as vegf and wnt analysis on the importance of dll4 in tumor vasculature development confirmed the anti-angiogenic role of this gene results revealed that dll4 blockade leads to the formation of a hyper-ramified but hypoperfused vasculature that cannot support tumor growth this fact indicated dll4 as a possible therapeutic target for cancer 14[close]
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