Métodos de detección de Campylobacter sp.

 

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capítulo 1 campilobacteriosis sección 4 investigación de campylobacter en los alimentos el reconocimiento de que campylobacter es un patógeno importante del hombre y los animales ha llevado al desarrollo rápido de técnicas y medios para el aislamiento y detección de las dos especies más importantes del mismo existen 2 sistemas básicos de aislamiento de campylobacter a partir de muetsras de alimentos o muestras de heces cultivo en un medio de enriquecimiento y aislamiento posterior en medios selectivos precedido de resucitación si es necesario 2 1 separación física de los campylobacter del resto de las bacterias mediante filtración a través de membranas de 0,65 µm de tamaño de poro y seguidamente incubación del filtrado en un medio no selectivo.

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la muerte de los campylobater durante el transporte es un problema serio las muestras deben ser procesadas lo más rápidamente posible y si tienen que trasportarse deben refrigerarse a 4ºc y nunca congelarse las muestras sólidas de alimentos pueden trasportarse en el medio cary-blair o en un medio de enriquecimiento adecuado la supervivencia se favorece en un ambiente libre de oxígeno si no se dispone de una atmósfera adecuada para muestras líquidas suele bastar con añadir tioglicolato sódico al 0,15 la adición de bisulfato sódico al 0,01 también favorece la supervivencia la separación de los campylobacter mediante filtración es útil para recobrar algunas subespecies de c fetus a partir de heces de aves sin embargo no es una buena técnica para concentrar los campylobacter presentes en muestras de agua para estas muestras se ha descrito una técnica de centrifugación.

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como caldo de enriquecimiento se usan caldos como el suelen incubarse al menos dos caldos poniendo uno a 37ºc y preston doyle y roman o rosef que llevan polimixina b trimethroprim y vancomicina o rifampicina otro a 42-3ºc la temperatura de 37ºc es la más adecuada para recobrar c jejuni de muestras de agua y algunas susbespecies de c fetus que no crecen a 43ºc se parte de 100 ml de agua que se centrifugan a 20.000 g durante 10 minutos el precipitado se resuspende en 50 ml de caldo de enriquecimiento si se parte de leche es obligado subir el ph de la leche a 7,5 añadiendo 1mol/l de naoh para inhibir el sistema lactoperoxidasa que puede inhibir el crecimiento de los campylobacter.

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si se parte de carcasas de aves lo más práctico suele ser repasar la supercifie con un hisopo estéril 25 0 100 cm2 e inocular el hisopado en un tubo con medio cary-blair l cultivo de campylobacter debe hacerse en condiciones de microaerofilia para ello pueden utilizarse estufas especiales o jarras a las que se añaden sobres generadores de la mezcla de gases adecuada se incuba a 37ºc y 42ºc durante 24-48 horas e campylobacter necesita factores de crecimiento para crecer los medios más utilizados son el preston skirrow butzler y el campy-bac que contienen sangre y un número variable de antibióticos como polimixina vancomicina etc para evitar el crecimiento de la flora competidora.

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los microorganismos que hidrolizan el hipurato forman glicocola cuando el hipurato está presente añadiendo ninhidrina al medio se observa la formación de glicocola por la aparición de color azul jejuni hidroliza el hipurato y es sensible a Ácido nalidíxico c coli y c fetus no hidrolizan el hipurato y c.fetus es además resistente a Ácido nalidíxico c

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