1b/2k

 

Embed or link this publication

Description

1b/2k

Popular Pages


p. 1

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Федеральное бюджетное учреждение науки ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ВИРУСОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ «ВЕКТОР» На правах рукописи Чуб Елена Владимировна РЕКОМБИНАНТНЫЕ ВАРИАНТЫ ВИРУСА ГЕПАТИТА С ТИПА 2k/1b НА ЮГЕ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.01.03 – «молекулярная биология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук член-корр. РАН, профессор Нетесов С.В. Кольцово 2015

[close]

p. 2

ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ………………………...…4 ВВЕДЕНИЕ …………………………………………………………………....……5 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ …………………………………………………..12 1.1 Строение генома ВГС, гены и их значение……………………………….12 1.1.1 Нетранслируемые области……………………………………………….…14 1.1.2 Структурные белки………………………………………………….………14 1.1.3 Неструктурные белки………………………………..……………………...17 1.2 Классификация ВГС: генотипы, субтипы…………………………………….22 1.3 Клинические аспекты генотипов ВГС ………………………………...…….24 1.4 Эпидемиологические аспекты ВГС, основные пути распространения….…26 1.5 Географическое распределение генотипов ВГС………………………….…32 1.6 Понятие рекомбинации ВГС, данные об известных рекомбинантах всех типов………………………………………………………………………………..35 1.7 Заключение…………………………………………………………….……….44 Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ…………………………………….……….47 2.1 Сбор образцов …………………………….……………………………...….…47 2.1.1 Группа пациентов с диагнозом острый гепатит ……………..……….…47 2.1.2 Группа пациентов с диагнозом хронический гепатит………………....48 2.2 Эпидемиологическое исследование ……………………………………….…48 2.2.1 Анкетирование ……………………………………………………….…...48 2.2.2 Обработка эпидемиологических данных …………………………….…48 2.3 Диагностические тест-системы ……………………………………………....49 2.4 Химические реактивы, ферменты и наборы ……………………….………..50 2.5 Диагностика РНК ВГС …………………………………………….….……….51 2.5.1 Выделение суммарной РНК ……………………….………….………….51 2.5.2 Обратная транскрипция (ОТ) ……………………………….…………...51 2.5.3 ПЦР-амплификация ……………………………………….…….………..52 2.6 Определение генотипа ……..…………………………………….….………..54 2

[close]

p. 3

2.6.1 Детекция и очистка продуктов амплификации ………………………..54 2.6.2 Определение нуклеотидных последовательностей ….………….……...54 2.6.3 Анализ последовательностей …….……………………………………...55 2.7 Определение точки рекомбинации ……………………………………….….55 2.7.1 Дизайн праймеров для области NS2 …………………………………....55 2.7.2 Пошаговое сканирование (bootscan) …………………………….……...58 2.8 Дизайн праймеров для скринингового определения генотипа ВГС ………58 2.9 Определение геномной последовательности изолята PSA424………..……61 2.10 Определение времени формирования рекомбинантных изолятов………...61 Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ………………………………..…….63 3.1. Характеристики обследуемой группы ……………………………….……...63 3.1.1. Половозрастной состав группы ………………………………….……..63 3.1.2. Эпидемиологические данные для инфицированных лиц …….………64 3.2. Встречаемость субтипов ВГС на территории Алтайского края ….……….69 3.3. Характеристики обнаруженных изолятов 2k/1b, подтверждение точки рекомбинации ……………………………………………………………………...76 3.4 Данные о носителях изолятов 2k/1b, клиническая картина ………………77 3.5 Создание мультиплексной системы для скринингового генотипирования изолятов ВГС. Выявление новых рекомбинантных изолятов.…….…………...79 3.6. Филогенетическое сравнение полученных изолятов 2k/1b с описанными ранее ………………………………………………………………………………...83 3.7 Оценка доли изолятов 2k/1b в общей популяции ВГС на территории бывшего СССР ……………………………………………………..………………92 ЗАКЛЮЧЕНИЕ ……………………………………..……………….………..…...95 ВЫВОДЫ ………………………………..…………………………………..…..…99 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ……….………………..…...101 Приложение……………………………………………………………………….118 3

[close]

p. 4

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ АТ АЛТ ВГВ ВГС ВИЧ ВОЗ ИФА ЛПНП ЛПОНП ОТ-ПЦР СВО 5’-UTR ARF CRF HGV HVR ICTV антитела аланинаминотрансфераза вирус гепатита В вирус гепатита С вирус иммунодефицита человека Всемирная Организация Здравоохранения иммуноферментный анализ Липопротеины низкой плотности Липопротеины очень низкой плотности обратная транскрипция – полимеразная цепная реакция стойкий вирусологический ответ 5’-untranslated region (5’-нетранслируемая область) alternative reading frame (альтернативная рамка считывания) циркулирующая рекомбинантная форма hepatitis G virus (вирус гепатита G) hypervariable region (гипервариабельный район) International Committee on Taxonomy of Viruses (Международный Комитет по Таксономии Вирусов) IRES ISDR internal ribosome entry site (внутренний сайт посадки рибосом) interferon National sensitivity Health and determining Nutrition region (регион, Survey определяющий (Национальное чувствительность к интерферону) NHANES Examination Исследование Здоровья и Питания) NJ OR ORF PePHD RdRp RT SPP UPGMA neighbor joining (метод объединения ближайших соседей) odds ratio (отношение шансов) open reading frame (открытая рамка считывания) PKR-eIF2a phosphorylation homology domain RNA-dependent RNA-polymerase (РНК-зависимая РНК-полимераза) reverse transcriptase (обратная транскриптаза) signal peptide peptidase (сигнальная пептидная пептидаза) unweighted pair group method using arithmetic averages (метод невзвешенных попарных средних) 4

[close]

p. 5

ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы Гепатит С является контагиозной болезнью печени, развивающейся в результате инфицирования вирусом гепатита С (ВГС). Гепатит С отличается часто бессимптомным вначале течением, и высокой степенью хронизации инфекции, которая может варьировать по степени тяжести от легкого заболевания, продолжающегося несколько недель, до серьезного состояния, приводящего к развитию цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. По оценкам Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) в настоящее время более 170 миллионов человек в мире инфицированы ВГС. Ежегодно 3-4 миллиона человек заражаются и более 350 тысяч человек умирают от связанных с гепатитом С болезней В России с печени начала (http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs164/ru/). регистрации инфекции в 1994 году наблюдался рост заболеваемости ВГС, достигший пика в 2000 году, (21,0 случай на 100 тыс. населения), с тех пор фиксируют постепенное снижение количества заболевших до 1,5 случая на 100 тыс. населения с 2013 году (http://www.gks.ru/wps/wcm/connect/rosstat_main/rosst at/ru/statistics/population/healthcare/). Однако эти данные не отражают полной картины, поскольку лица с хронической инфекцией ВГС с отсутствием симптомов заболевания, количество которых достигает 90%, не попадают в поле зрения официальной статистики. Примерно у 75-85% инфицированных людей со временем развивается хроническое заболевание, у 5-20% развивается цирроз, а 1-5% умирают от цирроза или рака печени. В настоящее время более чем у 25% пациентов с раком печени основополагающей его причиной является гепатит С. Эти данные, отсутствие вакцины, а также тот факт, что в эпидемиологический процесс ВГС в основном вовлечено население репродуктивного возраста, 5

[close]

p. 6

делают гепатит С одной из центральных проблем практического здравоохранения. Изучению вопросов эпидемиологии вирусного гепатита С в России по прежнему уделяется недостаточное внимание, в то время как анализ эпидемиологических данных в течение длительного времени может позволить сделать выводы об изменении основных факторов риска и эффективности применяемых превентивных программ. Мониторинг же за циркулирующими генотипами необходим для углубленной эпидемиологической оценки ситуации на данной территории. В настоящее время для лиц, инфицированных гепатитом С, имеется немало новых способов лечения, которые в значительной степени замедляют развитие болезни, предупреждают возникновение цирроза и рака печени и в конечном итоге снижают смертность. Определение генотипа (субтипа) вируса имеет важное клиническое значение для определения тактики терапии при лечении ВГС-инфицированных пациентов и для прогноза эффективности лечения. Известно, что пациенты, инфицированные ВГС 2 или 3 генотипа, лучше поддаются лечению, быстрее и значительно чаще достигают стойкого вирусологического ответа по сравнению с пациентами, инфицированными ВГС 1 генотипа. До недавнего времени полагали, что генетическая вариабельность вируса гепатита С ограничивается несколькими генотипами, образовавшимися в результате эволюционной дивергенции, однако открытие рекомбинантных изолятов указало еще один путь формирования генетического разнообразия популяции ВГС. Межгенотипные рекомбинанты имеют нуклеотидные последовательности разных генотипов в структурной и неструктурной части их генома. И лечение пациентов, инфицированных рекомбинантными ВГС, представляет собой дополнительную проблему, поскольку остается неясной взаимосвязь рекомбинантного харектера изолята и его восприимчивости к антивирусной терапии. Ответ на этот вопрос могло бы дать наблюдение за ходом лечения пациентов, инфицированных рекомбинантными изолятами ВГС, и анализ генетической вариабельности этих изолятов в течение антивирусной 6

[close]

p. 7

терапии, особенно геномных областей, непосредственно определяющих чувствительность к интерферону. Другую проблему представляет собой диагностика рекомбинантных изолятов. Стандартным методом обнаружения рекомбинации между различными генотипами и субтипами ВГС является генотипирование, основанное на филогенетическом анализе, по крайней мере, двух геномных регионов, расположенных как можно дальше друг от друга. Обычно для этой цели используются регионы 5’UTR и NS5b. Однако, используемый в рутинной практике генотипический анализ, основанный только на одном фрагменте генома, преимущественно 5’UTR, как наиболее консервативного и диагностически ценного региона, не дает возможности выявлять рекомбинантные изоляты ВГС. Диагностическая ошибка в генотипировании ВГС и не определение рекомбинантного изолята может иметь серьезные последствия из-за выбора неверной схемы лечения и его неудовлетворительного результата. Выявление истинной встречаемости рекомбинантных изолятов на территории Западной Сибири, их происхождение, преимущественные пути передачи в сравнении с другими субтипами ВГС а также разработка удобного метода диагностики рекомбинантных изолятов типа 2k/1b и явились предметом изучения для настоящей работы. Цели и задачи исследования Целью настоящего исследования являлось изучение распространенности, путей передачи и генетического разнообразия рекомбинантных изолятов ВГС типа 2k/1b на территории Западной Сибири. Для достижения указанной цели решались следующие задачи: 1. Проведение комплексного молекулярно-эпидемиологического исследования проб от больных Клиники инфекционных болезней городской больницы №5 г. Барнаул (Алтайский край), включающего анкетирование обследованных лиц, сбор образцов сывороток крови и исследование их на наличие серологических маркеров и РНК вирусного гепатита С с последующим статистико-эпидемиологическим анализом данных. 7

[close]

p. 8

2. Разработка метода скринингового генотипирования изолятов ВГС, позволяющая определять субтипы циркулирующие на территории России, включая рекомбинантные изоляты типа 2k/1b. 3. Скрининг клинических образцов сывороток крови, полученных от пациентов инфицированных ВГС в период 2005 -2014 с целью выявления рекомбинантных изолятов. 4. Определение полной нуклеотидной последовательности генома одного из обнаруженных рекомбинантных изолятов и фрагментов генов Core, Е1, NS2 и NS5b для остальных. 5. Проведение филогенетического анализа последовательностей выявленных рекомбинантных изолятов. Научная новизна и практическая ценность 1. В ходе комплексного молекулярно-эпидемиологического исследования ВГС у пациентов с симптомами острого гепатита в г. Барнаул впервые на территории Сибири выявлены 3 случая инфицирования рекомбинантной формой CRF01_1b2k Разработана ВГС. Подтверждена система точка для рекомбинации в последовательности гена NS2. 2. мультиплексная генотип-специфичной амплификации фрагмента области NS2 ВГС. Разработанный метод позволяет различать генотипы ВГС 1b, 2 (2a, 2c или 2k), 3a и рекомбинантные варианты типа 2k/1b при помощи ОТ-ПЦР с последующей электрофоретической детекцией. Чувствительность (85%) и специфичность (100%) системы подтверждена при тестировании образцов с предварительно установленным генотипом ВГС. 3. В период 2005-2014г. при генотипировании с использованием созданной системы 496 изолятов ВГС, выделенных в г.Новосибирске, было выявлено 5 новых случаев рекомбинантной формы. Таким образом, частота встречаемости CRF01_1b2k составила 1%. 8

[close]

p. 9

4. Определены нуклеотидные последовательность фрагментов генома (Core, E1, NS2, NS5b) восьми выявленных рекомбинантных изолятов. Для изолята PSA-424 определена нуклеотидная последовательность полного генома. 5. Показано, что рекомбинантные формы ВГС типа 2k/1b, вне зависимости от географического района их обнаружения, имеют высокую степень гомологии генома и близкое филогенетическое родство, что говорит о единстве их происхождения. Наиболее вероятное время появления рекомбинантной формы CRF01_1b2k, рассчитанное методом молекулярных часов, ноходится в интервале 1959-1977гг. Положения, выносимые на защиту: 1. Разработана мультиплексная система для генотип-специфичной амплификации фрагмента области NS2 ВГС, позволяющая различать генотипы ВГС 1b, 2 (2a, 2c или 2k), 3a и рекомбинантные варианты типа 2k/1b. 2. Рекомбинантные формы ВГС типа 2k/1b стабильно циркулируют в различных группах населения Западной Сибири с частотой встречаемости не менее 1%. 3. Рекомбинантные изоляты ВГС типа 2k/1b, вне зависимости от географического 1977гг. Вклад автора: Результаты по теме диссертации за исключением работ, связанных с анкетированием пациентов и проведением серологических тестов были получены лично автором. Апробация работы и публикации региона их обнаружения, имеют общего предка, образовавшегося на территории бывшего Советского Союза в период 1959 - 9

[close]

p. 10

Результаты работы были представлены в форме докладов на Российской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных болезней» (Новосибирск, 25-27 июня 2005 г.); на заседании рабочей группы «Nosocomial and iatrogenic viral hepatitis in Russia and in the Baltic Network supported by the Swedish Institute» в рамках конгресса «7th Nordic-Baltic Congress on Infectious Diseases» (Riga, Latvia, September 17-20, 2006); на научнопрактической конференции «Диагностика и профилактика инфекционных болезней», (Новосибирск, 26-28 сентября 2013 г.) в форме постерных докладов на VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Генодиагностика инфекционных болезней - 2007» (Москва, 28–30 ноября 2007 года), на Международном вирусологическом конгрессе « XIV International Congress of Virology» ( Istanbul, 10-15 August, 2008). Материалы диссертации опубликованы в 5 статьях и представлены в 14 тезисах трудов конференций. Настоящая работа выполнена в лаборатории молекулярной эпидемиологии ООИ Отдела молекулярной вирусологии флавивирусов и вирусных гепатитов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», в лаборатории клинической молекулярной информативной медицины Nagoya City University Graduate School of Medical Sciences, г. Нагоя, Япония, а также вирусологической лаборатории Swedish Institute for Infection Disease Control, г. Стокгольм, Швеция. Благодарности: Автор приносит благодарность своим коллегам по лаборатории и сотрудникам ФБУН ГНЦ ВБ “Вектор”, в тесном сотрудничестве с которыми была выполнена диссертационная работа, а именно: д.б.н., проф. В.Б. Локтеву, к.б.н. В.А. Терновому, к.б.н. Г.В. Кочневой, к.б.н. А.А. Гражданцевой, к.б.н. Г.Ф. Сиволобовой, к.ф.-м.н. А.Н. Швалову, С.А. Походне. Также признательна врачам Клиники инфекционных болезней городской больницы №5 г. Барнаул (Алтайский край) – О.И. Матрос, И.Г. Клиновенко, 10

[close]

p. 11

И.А. Хорошиловой, В.М. Гранитову за сбор образцов и проведение анкетирования пациентов. Автор благодарит коллег из лаборатории клинической молекулярной информативной медицины Nagoya City University Graduate School of Medical Sciences, г. Нагоя, Япония – Fuat Kurbanov, Dr. Masashi Mizokami и вирусологической лаборатории Swedish Institute for Infection Disease Control, г. Стокгольм, Швеция – PhD, Ass Prof. Heléne Norder, Prof. Lars Magnius за помощь в проведении экспериментов и совместный анализ полученных данных. Особую благодарность автор выражает своему научному руководителю д.б.н., член-корр. РАН, профессору Сергею Викторовичу Нетесову за помощь в выборе темы и направления исследований и всестороннюю поддержку. Настоящая работа выполнена за счет финансирования по грантам Международного научно-технического центра (МНТЦ) №1637р «Изучение частоты №3255р встречаемости, «Исследование по распределения иммунологических МФТИ для генотипов и и молекулярной свойств «Создание вирусных вариабельности изолятов вируса гепатита С в Сибирских регионах России» и структурных №00012/00049 рекомбинантных белков Е1 и Е2 ВГС, экспрессированных в клетках млекопитающих», региональной гепатитов». гранту Фонда референс-лаборатории ПЦР-диагностики 11

[close]

p. 12

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Строение генома ВГС, гены и их значение Вирус гепатита С (ВГС), являющийся этиологическим агентом гепатита С, на сегодняшний день служит основной причиной хронического гепатита, цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Отличительной его особенностью является способность вызывать латентное или малосимптомное течение заболевания, большей частью остающееся нераспознанным и высокая степень (до 80%) хронизации инфекции. ВГС – это небольшой (с диаметром сферических вирусных частиц 55 -65 нм) оболочечный вирус, содержащий одноцепочечную (+)РНК, являющийся единственным видом рода Hepacivirus в составе семейства Flaviviridae, согласно последней классификации вирусов, принятой Международным комитетом по таксономии вирусов в 2011 г. (King, 2011). В настоящее время еще 2 вируса претендуют на вхождение в род Hepacivirus, но еще не являются утвержденными как виды. Это GB virus B, способный инфицировать тамаринов (Bukh и др, 1999), и гепацивирус собак (CHV, canine hepacivirus) (Kapoor и др, 2011). Так же недавно обнаружены гепацивирусы у лошадей ( Burbelo и др, 2012) и мелких грызунов (Drexler и др, 2013). Получены электронные микрофотографии ВГС (Ishida и др., 2001). Нуклеокапсид вируса содержит один белок (белок С, Core), а в состав липопротеиновой оболочки входят два гликопротеина (E1 и E2), которые, образуют шипы, выступающие над поверхностью липидной мембраны на 6 нм (Shimizu и др., 1996). Структура вирусной частицы ВГС приведена на Рис. 1.1. Рис. 1.1 Структура вирусной частицы ВГС 12

[close]

p. 13

Геном ВГС несегментирован и представляет собой одноцепочечную (+)РНК длиной около 9600 н. (King, 2011). Схема генома продставлена на Рис. 1.2. На 5’- и 3’-концах геномной РНК ВГС имеются нетранслируемые области, существенно различающиеся как по длине, так и по функциям. Расположенная между ними открытая рамка считывания (ORF) кодирует полипротеин длиной 3010-3033 а.к. в зависимости от образующихся в результате работы субтипа вируса, который является клеточных и вирусных протеаз. предшественником 3 структурных и 7 неструктурных вирусных белков, Структурными белками ВГС являются: Core – РНК-связывающий капсидный белок и поверхностные гликопротеины Е1 и Е2. К неструктурным белкам относят: p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B. После структурных белков первым расположен небольшой белок p7, комплекс на основе которого выполняет функцию ионного канала (Dubuisson, 2007). Рис. 1.2 Структура генома ВГС и вирусные белки (Banerjee и др., 2010). 13

[close]

p. 14

Геном ВГС так же имеет альтернативную «+1» рамку считывания (ARF), которая перекрывает последовательность гена Core. ARF не имеет стартового кодона и трансляция обеспечивается рибосомальным сдвигом рамки считывания. Функции образующихся химерных белков до настоящего времени не выяснены (Dubuisson, 2007). 1.1.1 Нетранслируемые области 5’- нетранслируемая область (5’UTR) является наиболее эволюционно консервативной областью генома ВГС. Длина этого района составляет 341 н. для большинства изолятов ВГС. В последовательности 5’UTR выделяют 4 основных структурных домена, в пределах которых отмечают отдельные шпильки. Значительную часть 5’UTR занимает внутренний сайт посадки рибосом (IRES, internal ribosome entry site), обеспечивающий кэп-независимую трансляцию полипротеина ВГС. При этом показано, что для проявления функциональной активности IRES важными являются вторичная и третичная структуры этого района генома. Поэтому высокие требования к консерватизму 5’UTR определяются необходимостью сохранения шпилечных структур и правильных расстояний между ними (Wang и др., 1994). 3’-нетранслируемая область состоит как из высоко консервативных, так и весьма вариабельных районов. За вариабельным районом 3’UTR (н. 23-66) следует поли-(U)-тракт, переходящий в полипиримидиновый тракт, за которым расположена высоко консервативная последовательность 3’-X, длиной 98 н., которая требуется для инициации репликации (Kolykhalov и др., 1996). 1.1.2 Структурные белки С-белок или Core является РНК-связывающим белком, который формирует вирусный нуклеокапсид. Он отщепляется сигнальной пептидазой хозяина от общего полипротеина с образованием белка-предшественника (p21), который подвергается дальнейшему процессингу, в ходе которого сигнальная пептидная пептидаза (SSP) отщепляет с С-конца сигнальную 14

[close]

p. 15

последовательность из 20 гидрофобных аминокислот с образованием зрелой вирионной формы белка (p19) (McLauchlan и др, 2002). В ядрышках инфицированных гепатоцитов обнаруживается p16 форма Core, обладающая онкогенными свойствами (Irshad и др., 2006). В составе Core около 20% основных аминокислот (Lys и Arg), что позволяет связываться с РНК ВГС in vitro с образованием вирусоподобных частиц (Kunkel и др., 2001). В последовательности белка Core нет сайтов гликозилирования. Выделяют два домена: гидрофильный домен (D1), составляющий две трети Core с N-конца и гидрофобный домен (D2), включающий С-концевую треть белка. D1 домен содержит значительное количество положительно заряженных аминокислот, что считается необходимым для связывания с РНК. Домен D2 обеспечивает правильную конформацию домена D1 и необходим для олигомеризации белка. Стоит отметить, что если домен D1 аналогичен капсидным белкам пести- и флавивирусов, то домен D2 отсутствует у представителей данных родов, но характерен для HGV (Boulant и др, 2006). Поверхностные гликопротеины Е1 и Е2 вируса гепатита С играют важную роль на различных этапах жизненного цикла вируса. Они необходимы для проникновения вируса в клетку (Cocquerel и др., 2006) и участвуют в сборке инфекционных вирусных частиц (Dubuisson, 2007). Гетеродимер E1-E2, присутствующий на поверхности вирусных частиц является лигандом для клеточнык рецепторов. Использование растворимой формы гликопротеина E2 привело к выявлению ряда предполагаемых рецепторов для вируса гепатита С: CD81 (Pileri и др., 1998), скэвенджер-рецептор класса B тип I (Scavendger Receptor class B type I, SR-BI) (Scarselli и др., 2002), гепарин сульфат (Barth и др., 2003), лектины DC-SIGN и L-SIGN (Pöhlmann и др., 2003). Еще одного кандидата в рецепторы для вируса гепатита С – асиалогликопротеиновый рецептор – позволило обнаружить использование вирусоподобных частиц (Saunier и др., 2003). Кроме того, из-за физической ассоциации HCV с ЛПНП и ЛПОНП в сыворотке крови, рецепторы для ЛПНП также рассматривались в качестве кандидата в рецепторов для вируса гепатита С (Monazahian и др., 15

[close]

Comments

no comments yet